天天中彩票app下载

天天中彩票app下载您的位置:网站天天中彩票app下载 >天天中彩票app下载 > 不同非洲猪瘟病毒实验室检测方法的对比
不同非洲猪瘟病毒实验室检测方法的对比
发布时间:2019-03-08   点击次数:1155次

不同非洲猪瘟病毒实验室检测方法的对比

 

一、简介

非洲猪瘟(Africann Swine Fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)感染引起的家猪和野猪的一种急性、热性、高度接触性传染病1。临床症状与猪瘟极其相似,以高热、皮肤发绀、内脏器官严重出血、呼吸障碍和神经症状为主要特征。本病传播快、致死率高,对养猪业危害巨大,是我国一类动物疫病和世界动物卫生组织(OIE)规定的必须报告的动物疫病,受到世界各国的高度重视2。本病是以节肢动物作为传播媒介的DNA病毒。ASF已在非洲、欧洲和美洲等几十个国家暴发,“三全水饺事件”则将非洲猪瘟直接推向大众的面前。目前,本病尚无有效的预防疫苗和治疗药物,防止疫情扩大的有效措施就是扑杀。因此事先建立简便、快速、准确的ASFV检测方法显得十分必要。本文ASFV实验室检测的不同方法,进行对比分析

二、检测方法

2.1 血清学检测方法

2.1.1酶联免疫吸附试验(ELISA)

ELISA利用抗原抗体进行免疫反应的定性和定量检测,应用于血清抗体的检测,适用于大批量样品的检测。ASFV含有约150种蛋白,目前国内外常用作检测抗原的蛋白有VP73、VP72、P54、P32、P30等3。

优点快速、方便。

缺点:(1)一般情况下, 非洲猪瘟病毒进入猪体内, 7天后才能诱导产生较高的Ig G抗体,而7天的时候,足以出现早期临床症状,并已经传染给其他家猪,因此该检测方法往往具有难以解决的滞后性。(2)针对不同蛋白会出现个别差异,增加排查的难度3

2。1。2胶体金免疫层析(GICA)试纸条

运用双抗体夹心法原理纯化后的抗ASFV单克隆抗体制备金标抗体, 应用于检测ASFV的胶体金免疫层析试纸条,也称为检测卡

优点:使用方便;

缺点:(1)灵敏度低;(2)一般情况下, 非洲猪瘟病毒进入猪体内, 7天后才能诱导产生较高的Ig G抗体,而7天的时候,足以出现早期临床症状,并已经传染给其他家猪,因此该检测方法往往具有难以解决的滞后性3

2.1。3荧光抗体试验(FAT)

荧光抗体试验(FAT)可用于检测野外可疑猪或实验室接种猪的脾、淋巴结等组织压片和冰冻切片中的ASFV抗原。

优点敏感性和特异性较佳;

缺点:需要专业试验人员,同时需要荧光显微镜及高质量的荧光标记抗体。因此仅作为ASFV的辅助检测方法4

2.1。4免疫组化法

该方法用来检测急性感染ASFV猪的扁桃体组织病理学变化,通过检测发现,感染ASFV猪有出血、单核细胞增多现象。免疫组化法对于临床症状不明显的病例,确诊有一定难度,因此,该方法仅作为ASFV的辅助检测方法。

优点特异性较佳;

缺点:对于临床症状不明显的病例,确诊有一定难度4

2。2分子生物学检测方法

2.2.1 PCR

体外扩增基因的一种方法,是目前ASFV常用的实验室检测方法。研究表明,非洲猪瘟感染8小时, 便可从血液中检测到其核酸物质,因此针对非洲猪瘟病毒保守区域设计引物,对采集的血液或组织病料等相关物质进行DNA提取,进行PCR反应,可对其进行快速准确诊断。是目前ASFV最常用的实验室检测方法。众多国内外研究5-9建立了ASFV的PCR检测方法,表明该方法具有良好的敏感性和特异性,可以检测出极低含量的ASFV,为ASFV早期感染的快速诊断提供了有效的分子生物学检测方法。

优点:简单快速、灵敏度高和特异性强

2。2。2 荧光定量PCR

通俗讲是PCR的升级版。实时荧光定量PCR比常规PCR具有更高的敏感性和特异性,可同时快速检测大批量样品,其更加敏感、准确。举例,McKillen等10(2010)根据9GL基因建立了MGB探针实时荧光定量PCR检测方法,最低可以检测到20拷贝标准DNA。

优点:敏感性和特异性高。

2.2.3 探针杂交技术

能有效排除PCR检测过程中的非特异性结果, 省去了琼脂糖凝胶电泳步骤,操作简便、检测迅速,在酶标板中可批量反应,为ASFV核酸检测方法开辟了新的途径,

该方法的建立难度较高、操作较繁琐, 对实验人员技术水平要求较高。

三、小结

  • 目前,ASFV的检测技术主要有针对病毒DNA的核酸检测技术和基于病毒抗原、抗体反应的免疫学技术两大类。
  • OIE推荐检测ASFV的方法主要有PCR、实时荧光定量PCR、ELISA等。用免疫学方法检测抗体可以了解ASFV感染、发生、发展的进程,但抗体只有在病毒感染至一定时期后才会出现,故ELISA等抗体检测方法存在一定的局限性和滞后性
  • PCR、实时荧光定量PCR等分子生物学技术在猪感染ASFV的早期即可检测到病毒核酸,在ASFV的早期检测中具有重要作用。
  • 总之,ASFV的实验室检测方法多种多样,但若要求检测结果准确、快速、敏感,我们推荐PCR、实时荧光定量PCR的方法,这不仅对感染ASFV的动物治疗非常重要,而且对未感染的动物及时采取有效的预防措施同样具有重要的意义。
  • 随着免疫学与分子生物学技术的不断发展,ASFV的实验室检测方法必将不断完善,进一步为我国开展ASF的监测与综合防控提供技术支持。

 

 

【参考文献】

1. 常华, 花群义, 段纲, 项勋, 曾昭文. 非洲猪瘟的研究进展. 中国畜牧兽医 2007; 34 (1):116-118.

2。 王君玮, 张玲, 王志亮, 王华, 包静月。 非洲猪瘟传入我国危害风险分析。 中国动物检疫 2009; 26 (3):63-66.

3。 常华, 花群义, 段纲。 非洲猪瘟病毒的分子生物学研究进展。 微生物学通报 2007; 34 (3):572-575。

4. 庄金秋, 梅建国, 谢金文, 李峰, 沈志强. 非洲猪瘟病毒实验室检测方法研究进展. 饲料与畜牧 2017;  (22).

5. Agüero M, Fernández J, Romero L, Sánchez MC, Arias M, Sánchezvizcaíno JM. Highly Sensitive PCR Assay for Routine Diagnosis of African Swine Fever Virus in Clinical Samples. Journal of Clinical Microbiology 2003; 41 (9):4431。

6。 曾少灵, 花群义, 张彩虹, 曹琛福, 秦智锋, 阮周曦, et al。 非洲猪瘟病毒PCR检测方法的建立。 动物医学进展 2009; 30 (10):6-10.

7。 Agüero M, Fernández J, Romero LJ, Zamora MJ, Sánchez C, Belák S, et al。 A highly sensitive and specific gel-based multiplex RT-PCR assay for the simultaneous and differential diagnosis of African swine fever and Classical swine fever in clinical samples。 Veterinary Research 2004; 35 (5):551-563。

8. 非洲猪瘟病毒和古典猪瘟病毒双重PCR及双重荧光PCR检测方法的建立与应用. 扬州大学; 2010.

9. Basto AP, Portugal RS, Nix RJ, Cartaxeiro C, Boinas F, Dixon LK, et al. Development of a nested PCR and its internal control for the detection of African swine fever virus (ASFV) in Ornithodoros erraticus. Archives of Virology 2006; 151 (4):819-826。

10. Mckillen J, Mcmenamy M, Hjertner B, Mcneilly F, Uttenthal Å, Gallardo C, et al. Sensitive detection of African swine fever virus using real-time PCR with a 5′ conjugated minor groove binder probe. Journal of Virological Methods 2010; 168 (1):141-146.

 

版权所有Copyright © 2018 无锡百泰克生物技术有限公司 All Rights Reserved.  网站地图      技术支持:
无锡百泰克生物技术有限公司主营:核酸纯化系统|自动吸头装载机|96通量核酸提取仪等产品
在线客服 二维码

扫一扫,关注我们

全民彩彩票开户 国民注册 天天中彩票app下载 天天中彩票官网 国民投注 天天中彩票app 全民彩彩票注册 周易彩票官网 纵达彩票 热购注册